土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒说明书 可见分光光度法

北京索莱宝科技有限公司土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。货号:BC0140规格:50T/48S产品内容：试剂一：液体21mL×1瓶，4℃避光保存。试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。用前加50mL蒸馏水充分溶解。试剂三：液体11mL×1瓶，4℃保存。试剂四：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加1152μL无水乙醇（自备），48μL蒸馏水充分溶解。（变褐色后不能再使用）标准品：液体1mL×1瓶，0.5μmol/mL苯酚标准液，4℃保存。产品说明：土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH显著影响，根据最适pH范围，通常分为酸性、中性和碱性三种类型。酸性环境中，S-ACP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成量即可计算出S-ACP活性。试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯。操作步骤：一、粗酶液提取：称取风干混匀土壤约0.1g，加入0.05mL甲苯（自备），轻摇15min；加0.4mL试剂一并且摇匀后，置于37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应24h；到时后迅速加入1mL试剂二充分混匀，以终止酶催化的反应。8000rpm，25℃离心10min，取上清液置于冰上待测。第1页，共2页北京索莱宝科技有限公司二、测定步骤：1.可见分光光度计预热30min以上，调节波长到660nm，蒸馏水调零。2.空白管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL试剂一，200μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水730μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A空白管。3.标准管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL标准液，200μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水730μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A标准管。4.测定管：取1mL玻璃比色皿，加入50μL上清液，200μL试剂三，20μL试剂四，充分混匀，显色后再加蒸馏水730μL，混匀后室温静置30min，于660nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。三、S-ACP活性计算：活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放1nmol酚为1个酶活单位。S-ACP（nmol/d/g）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总×1000÷W÷T=725×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷WC标准液：0.5μmol/mL；V总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催化反应时间，24h=1d；1000：单位换算系数，1μmol=1000nmol。注：线性范围为0.03125μmol/mL-1.5μmol/mL。第2页，共2页